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乳制品中三聚氰胺的高效液相色谱检测法

来源: 本站  类别:技术文章  更新时间:2010-4-8 11:48:43  阅读

三聚氰胺(Melamine)是一种重要的三嗪类含氮杂环有机化工原料,主要用于生产三聚氰胺-甲醛树脂,广泛用于木材加工、塑料、涂料、造纸、纺织、皮革等行业,为白色晶体。三鹿奶粉事件引发了对三聚氰胺检测的广泛关注,国家质量监督检验检疫总局和国家标准化管理委员会相继发布了《原料乳与乳制品中三聚氰胺检测方法》(GB/T22388-2008)和《原料乳中三聚氰胺快速检测 液相色谱法》(GB/T22400-2008)的国家标准。本文参考了以上标准并进行配制条件优化,建立了液相色谱检测法,前处理简单,检测限、精密度、重现性以及回收率均符合国家标准。
 
1   实验部分
1.1 仪器与试剂
高效液相色谱仪(含UV1620紫外-可见检测器1台,P1620高压恒流泵1台;AT-330色谱柱温箱;FA2004分析天平;TGL-16G-A离心机;三聚氰胺标准品>99%;辛烷磺酸钠(色谱纯);磷酸(分析纯)、乙腈(色谱纯)、纯净水。
1.2 标准品溶液配制
精密称取三聚氰胺标准品,溶于50%的甲醇水溶液,配制称1.422mg/ml的标准储备液,于4℃避光保存。根据实验需要,用流动相逐级稀释成适当浓度的标准工作液。
1.3 样品前处理
称取2g酸奶样品与50ml具塞离心管中,加入乙腈:水=50:50混合溶液15ml,充分混匀后超声提取15min。取提取液250ul,加入0.1mol/l盐酸750ul,混匀,以12000r/min离心5min,取上清液,0.22um滤膜过滤,作为HPLC测定溶液。
1.4 色谱条件:
色谱柱:Globalsil C18 5μm(ID4.6mm×250mm)
流动相:乙腈/缓冲盐=15/85(缓冲盐:10mM辛烷磺酸钠水溶液,含0.1%磷酸)
流速:1.0ml/min
波长:240nm
温度:40℃
进样量:20μl
 
2   实验结果
2.1 精密度实验
取浓度为0.569μg/ml三聚氰胺标准工作液,按上述色谱条件,连续进样5次,以各成分峰面积计算RSD(%),所得结果如表1所示:保留时间相对标准偏差(RSD)为0.23%,峰面积RSD为0.57%。
表1 精密度实验
NO.
Retention time(min)
Peak High
Peak Area
1
11.933
289
4216.8
2
11.990
290
4264.2
3
11.928
287
4246.0
4
11.927
287
4242.8
5
11.923
284
4218.6
RSD(%)
0.23
0.82
0.57
图1 三聚氰胺标准品
2.2   标准曲线
配置浓度分别为0.142、0.284、0.853、1.422、7.110、14.220μg/mL的三聚氰胺标准工作液。将以上6种标准工作液在上述色谱条件下按浓度由低至高进样。用最小二乘法以对照品浓度(横坐标X轴,µg/ ml)对峰面积(纵坐标Y轴)进行线性回归,求算标准曲线。
2.3   加样回收率和重现性实验
取已知三聚氰胺含量的酸奶样品,加入一定量的标准储备液,按“样品前处理” 操作,平行制备3份,得到样品溶液后按上述色谱条件进样分析,得到加样回收率及重现性结果,见表2。
表2 加样回收率和重现性(n=3)
Spiked(mg/kg)
Recovery(%)
RSD(%)
35.0
87.2
1.37
图2 空白酸奶样品
图3 加标酸奶样品
2.4   检测限及定量限
依据噪声值,按3倍信噪比,计算其理论检出限,为0.221 mg/kg;按10倍信噪比,计算其定量限,为0.738 mg/kg。
 
3         结论
本方法优化了高效液相色谱法检测乳制品中三聚氰胺测定方法,该方法简化了前处理步骤,易于操作,线性关系良好,有较好的精密度和重现性,回收率满足国家标准的要求,检出限和定量限也符合目前三聚氰胺的检测要求。

推荐使用仪器:风速计/风速测量仪智能化农业环境监测仪/多参数环境记录仪

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